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技術(shù)文章

膠原酶

點(diǎn)擊次數(shù)：1816 發(fā)布時(shí)間：2012-11-15

科技名詞定義

中文名稱(chēng)：: 膠原酶
英文名稱(chēng)：: collagenase
定義：: 編號(hào)：EC 3.4.21.49。來(lái)自梭菌的酶，切割膠原蛋白中*殘基的氨基端肽鍵。而來(lái)自皮蠅（Hypoderma lineatum）幼蟲(chóng)的酶，切割天然膠原蛋白*殘基的氨基端肽鍵。
應(yīng)用學(xué)科：: 生物化學(xué)與分子生物學(xué)（一級(jí)學(xué)科）；酶（二級(jí)學(xué)科）

以上內(nèi)容由全國(guó)科學(xué)技術(shù)名詞審定委員會(huì)審定公布

求助編輯百科名片

膠原酶的化學(xué)名為膠原蛋白水解酶（Collagenase），它能在生理PH和溫度條件下特異性地水解天然膠原蛋白的三維螺旋結(jié)構(gòu)，而不損傷其它蛋白質(zhì)和組織。膠原酶的化學(xué)本質(zhì)是一種蛋白質(zhì)，因此，這對(duì)溫度、PH和導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性的各種因素均非常敏感，極易受到外界條件的影響而改變其本身的構(gòu)象和性質(zhì)。

簡(jiǎn)介

的配置

的使用

編輯本段簡(jiǎn)介

　　按其存在的方式不同可分為人體內(nèi)源性和藥用兩種。人體內(nèi)源性是指人體內(nèi)部本身所具有的，如牙齦、觸膜等上皮組織和關(guān)節(jié)滑膜、椎間盤(pán)內(nèi)都不同程度的存在著這種，它在體內(nèi)膠原蛋白的分解過(guò)程中發(fā)揮著*的作用。藥用是指利用生物制藥的高科技手段從溶組織梭狀芽孢桿菌的發(fā)酵液中提取、純化并精制而得的白色或類(lèi)白色無(wú)菌凍干粉針生物制劑。

　?。╟ollagenase）是從溶組織梭狀細(xì)胞芽孢桿菌提取制備的，主要水解結(jié)締組織中膠原蛋白成分。當(dāng)擬消化的組織較硬，內(nèi)含較多結(jié)締組織或膠原成分時(shí)，用*解離細(xì)胞的效果較差，這時(shí)可采用解離細(xì)胞法。僅對(duì)細(xì)胞間質(zhì)有消化作用而對(duì)上皮細(xì)胞影響不大。因此適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織，可使上皮細(xì)胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為zui終濃度200U/ml（約為1mg/mL）或0.03%~0.3%。分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細(xì)胞，要根據(jù)所要分離消化的組織類(lèi)型選擇類(lèi)型。

　　1、Ⅰ用于上皮、肺，脂肪和腎上腺組織細(xì)胞的分離。用于消化組織中連接部分使其成為單個(gè)細(xì) 胞，用于哺乳動(dòng)細(xì)胞的分離。

　　2、Ⅳ包含至少7種蛋白酶成分，分子量從68-130KD不等。它能消化多種組織。

　　3、Ⅴ包含至少7種蛋白酶成分，分子量從68-130KD不等。它可用于胰腺小島組織的分離，將結(jié)締組織分離成單個(gè)細(xì)胞。

　　4、Ⅱ適用于肝臟，骨，甲狀腺，心臟和唾液腺組織。

編輯本段的配置

　　溶液同*一樣配制、消毒滅菌和儲(chǔ)藏。

　　注意：

　　因?yàn)棰裥头肿宇w粒比*大，不容易過(guò)濾，因此可以用蔡式濾器過(guò)濾除菌。

　　鈣、鎂離子和血清成分不會(huì)影響的消化作用，因而可用BSS（如D-hanks或者PBS）或含血清的培養(yǎng)液配制。

編輯本段的使用

　　1.將漂洗、修剪干凈的組織剪成1~2mm3左右小塊

　　2.將組織塊放入離心管（三角燒瓶）中加入30~50倍體積的溶液，旋緊蓋子（密封燒瓶）。

　　3.將燒瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱內(nèi)，每隔3min振搖一次，如能放在37℃的恒溫震蕩水浴箱中則更好。

　　消化時(shí)間與組織的類(lèi)別很有關(guān)系，對(duì)于某些腫瘤組織或其他較致密結(jié)締組織，消化時(shí)間4~48h，對(duì)于容易消化的組織可以采用37℃震蕩消化15~45min，也可以根據(jù)具體情況而定。如組織塊已分散而失去塊的形狀，一經(jīng)搖動(dòng)即成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，可以認(rèn)為已消化充分。上皮組織經(jīng)消化后，由于上皮細(xì)胞對(duì)此酶有耐受性，可能仍有一些細(xì)胞團(tuán)未*分散，但成團(tuán)的上皮細(xì)胞比分散的單個(gè)上皮細(xì)胞更易生長(zhǎng)，因此，如無(wú)特殊需要可以不必再進(jìn)一步處理。

　　4.收集消化液（有時(shí)含個(gè)別組織塊及沒(méi)有充分消化的組織碎屑則需用100目不銹鋼網(wǎng)過(guò)濾），離心1000r/min，5min，去除上清，用Hanks液或者無(wú)血清培養(yǎng)液離心漂洗1~2次，去除上清，加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)瓶。

如有詳細(xì)請(qǐng)咨詢(xún)本公司

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