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細(xì)胞計(jì)數(shù)專題 | 熒光染料誘導(dǎo)的微生物培養(yǎng)基背景信號(hào)分析

2025-6-21 閱讀(6)

隨著點(diǎn)成微生物細(xì)胞計(jì)數(shù)儀 QUANTOM Tx™的推出,基于單細(xì)胞水平的細(xì)菌計(jì)數(shù)方法正在逐步取代傳統(tǒng)、耗時(shí)的 CFU/ml 測定。該儀器利用細(xì)胞膜通透性,借助熒光染料對(duì)細(xì)菌核酸進(jìn)行染色,可在幾分鐘內(nèi)快速完成準(zhǔn)確計(jì)數(shù)。

在微生物培養(yǎng)過程中,需根據(jù)菌種特性、生長條件及研究目標(biāo)選擇合適的培養(yǎng)基。盡管常規(guī)培養(yǎng)基本身不具備自發(fā)熒光特性,但其成分可能與熒光染料發(fā)生相互作用,進(jìn)而導(dǎo)致背景熒光增強(qiáng),影響信號(hào)判讀。因此,建議實(shí)驗(yàn)前將培養(yǎng)基(如添加了點(diǎn)成 QUANTOM™ 總細(xì)胞染色液)與熒光染料混合,評(píng)估背景噪聲水平差異,以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。

結(jié)果與討論

本研究所測試培養(yǎng)基包括:營養(yǎng)肉湯(NB)、魯里亞-貝爾塔尼(LB)肉湯、無羊血的大豆肉湯(TSB)、含羊血的大豆肉湯(TSB-SB)、酵母提取物蛋白胨葡萄糖(YPD)培養(yǎng)基、de Man-Rogosa-Sharpe(MRS)培養(yǎng)基。

圖1 顯示培養(yǎng)基與QD試劑按1:10混合后的背景信號(hào)變化(A:GFP信號(hào)對(duì)比蒙太奇圖;B:柱狀圖量化分析)

未添加點(diǎn)成QUANTOM™總細(xì)胞染色液時(shí),各培養(yǎng)基均未檢測到自發(fā)熒光背景信號(hào)。添加染色液后所有培養(yǎng)基均出現(xiàn)背景信號(hào)增強(qiáng)現(xiàn)象,其中MRS培養(yǎng)基背景噪聲顯著。建議實(shí)驗(yàn)操作時(shí)避免將熒光染料直接與培養(yǎng)基混合,而應(yīng)使用PBS緩沖液稀釋培養(yǎng)細(xì)胞,以消除背景熒光干擾。

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