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了解一下什么是氨基酸直接分析儀吧

閱讀:260      發(fā)布時(shí)間:2020-5-6
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   氨基酸直接分析儀是指用于測(cè)定蛋白質(zhì)、肽及其他藥物制劑的氨基酸組成或含量的方法。進(jìn)行氨基酸分析前,必須將蛋白質(zhì)及肽水解成單個(gè)氨基酸。

  它是基于陽(yáng)離子交換柱分離、柱后茚三酮衍生、光度法測(cè)定的離子交換色譜儀。氨基酸分析儀由色譜柱、自動(dòng)進(jìn)樣器、檢測(cè)器、數(shù)據(jù)記錄和處理系統(tǒng)組成。

  氨基酸直接分析儀的基本原理為流動(dòng)相(緩沖溶液)推動(dòng)氨基酸混合物流經(jīng)裝有陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的色譜柱,各氨基酸與樹(shù)脂中的交換基團(tuán)進(jìn)行離子交換,當(dāng)用不同的pH緩沖溶液進(jìn)行洗脫時(shí)因交換能力的不同而將氨基酸混合物分離,分離出的單個(gè)氨基酸組分與茚三酮試劑反應(yīng),生成紫色化合物或黃色化合物,用可見(jiàn)光檢測(cè)器檢測(cè)其在570nm、440nm的吸光度。

  這些有色產(chǎn)物對(duì)應(yīng)的吸收強(qiáng)度與洗脫出來(lái)的各氨基酸濃度之間的關(guān)系符合朗伯-比爾定律。

  據(jù)此,可對(duì)氨基酸各組分進(jìn)行定性、定量分析。氨基酸分析儀也可利用陰離子交換分離后經(jīng)積分脈沖安培法檢測(cè),該檢測(cè)方法無(wú)需將待測(cè)氨基酸進(jìn)行柱前或柱后衍生。

  通常細(xì)分為兩種系統(tǒng):蛋白水解分析系統(tǒng)(鈉鹽系統(tǒng))和游離氨基酸分析系統(tǒng)(鋰鹽系統(tǒng)),利用不同濃度和pH值的檸檬酸鈉或檸檬酸鋰進(jìn)行梯度洗脫。其中鈉鹽系統(tǒng)一次多分析約25種氨基酸,速度較快,基線平直度好;鋰鹽系統(tǒng)一次多分析約50種氨基酸,速度較慢,基線一般不如鈉鹽系統(tǒng)好。

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