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流感A 型IgM（FLU-A IgM）ELISA試劑盒使用說明書

                               本試劑盒僅供研究使用。

藥品名稱：

通用名：流感A 型IgM         （FLU-A IgM）酶聯(lián)免疫診斷試劑盒

使用目的：

    本試劑盒定性測定血液、或其它相關(guān)組織中流感A 型IgM                       （FLU-A IgM）

實驗原理：

    本試劑盒采用間接酶聯(lián)免疫法（ELISA）測定標(biāo)本中流感A 型IgM                        （FLU-A  IgM）。用

純化的流感A 型IgM        （FLU-A   IgM）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中流感A

型IgM  （FLU-A IgM）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的流感A 型IgM  （FLU-A IgM）和其他成

分后再與HRP  標(biāo)記的羊抗人抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后

加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃

色。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF 值相比較，從而判定標(biāo)本

中流感A 型IgM      （FLU-A IgM）的存在與否。

試劑盒組成：

  1   20 倍濃縮洗滌液         30ml×1 瓶  7      終止液                      6ml×1 瓶

  2   酶標(biāo)試劑              6ml×1/瓶      8   陽性對照                     0.5ml×1 瓶

  3   酶標(biāo)包被板             12 孔×8 條  9      陰性對照                     0.5ml×1 瓶

  4   樣品稀釋液             6ml×1 瓶      10  說明書                      1 份

  5   顯色劑A 液            6ml×1 瓶      11  封板膜                      2 張

  6   顯色劑B 液            6ml×1 瓶      12  密封袋                      1 個

標(biāo)本處理及要求：

    1．標(biāo)本處理：（1）血清、血漿標(biāo)本：可直接檢測

                 2）其它標(biāo)本：按相關(guān)文獻(xiàn)制備。

                 （

    2．標(biāo)本按要求制備后盡早進(jìn)行實驗。如不能及時檢測，可將標(biāo)本在-20℃保存一個月，

       但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

    3．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP ）活性。

操作步驟：

1.  編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2 孔、陽性對照2 孔、空白對照1

    孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）

2.  加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照（標(biāo)準(zhǔn)品）50μl。然后在待測

    樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，

    盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，

3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4.  配液：將20 倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml 后備用

5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此

    重復(fù)5 次，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl（或一滴），空白孔除外。
7.  溫育：操作同3。

8.  洗滌：操作同5。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl（或一滴），再加入顯色劑B  50μl（或一滴），輕輕震蕩混

    勻，37℃避光顯色15分鐘

10. 終止：每孔加終止液50μl（或一滴），終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止

    液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

結(jié)果判定：

    試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00;  陰性對照平均值≤0.15

    臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.20

    陰性判定：樣品OD 值<          臨界值（CUT OFF）者為流感A 型IgM             （FLU-A IgM）陰性

    陽性判定：樣品OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為流感A 型IgM                      （FLU-A IgM）陽性

注意事項

1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未

   用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M  的硫酸，使用時必須

   注意安全。

8. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)..

規(guī)格：

     96 人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個月