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公司動態(tài)

細胞內鈣測定

點擊次數(shù):567 發(fā)布時間:2010-1-25

式中Kd為 Fura-2與Ca 結合反應的介離常數(shù),37℃時其值為224nmol/L,Fmax是細胞內Fura-2全部為Ca 飽和時的熒光比值(采用Ca 載體),F(xiàn)min為Fura-2*未結合Ca 時的熒光比值。通過向介質中加入過量的EGTA將細胞內外的游離Ca 螯合,此時測得的zui小熒光值。F為實驗中以340nm和380nm波長激發(fā),500nm波長發(fā)射測定負載Fura-2/AM細胞的熒光比值。

 

靜息態(tài)時[Ca ]i<0.1umol/L。[Ca ]0濃度為1~1.5mmol/L,細胞內外[Ca ]相差104。細胞膜內外的[Ca ]差是細胞外的Ca 進入細胞內的推動力。

組織細胞以12.5%胰蛋白酶消化20-30 min)

37溫育10min, 加入Fura-2/AM(終濃度為2-5ug/ml),37℃恒溫震蕩45 min,負載后細胞以含0.2%牛血清白蛋白的Hank’s液洗2次,用Hank’s液調細胞數(shù)為1×106,測定前37℃復溫5-10 min。

37℃溫育10 min,測熒光(負載Fura-2/AM細胞的熒光比值F)

Triton X 100 100μl

37℃溫育5 min

340nm測熒光(zui大值Fmax)

20℃水浴5 min

冰浴 2 min

EGTA 80μl(40mM

水浴5 min → 冰浴 5 min

380 nm 測定熒光(zui小值Fmin)



 

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