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倒置顯微鏡是用于生物科學(xué)研究領(lǐng)域的多功能顯微鏡,其結(jié)構(gòu)復(fù)雜且價格昂貴,因此,要想醫(yī)學(xué)研究生正確掌握倒置顯微鏡的操作使用規(guī)范,教師得首先在示范倒置顯微鏡的實(shí)際操作之前,開設(shè)學(xué)習(xí)倒置顯微鏡基本知識的課程,介紹倒置顯微鏡的結(jié)構(gòu)、原理、功能和基本使用方法,再在具體的使用操作中,針對不同的標(biāo)本,示范不同的功能,由淺入深,逐漸使醫(yī)學(xué)研究生對倒置顯微鏡的操作使用規(guī)范化。
倒置顯微鏡如何正確使用呢,下面來介紹一下:
1.明視野觀察的正確使用。倒置顯微鏡的功能之一是明視野觀察,其基本原理是標(biāo)本經(jīng)光線照射后,各部分對光吸收的不同而在明亮的背景中實(shí)現(xiàn)成像,主要適用于經(jīng)染色或本身具有顏色的細(xì)胞、組織切片等標(biāo)本的觀察。
2.相差觀察的正確使用。倒置顯微鏡的功能之二是相差觀察,其基本原理是將樣本不同部分的光程差轉(zhuǎn)變?yōu)檎穹睿?jīng)過帶有相位片的相差物鏡和帶有環(huán)狀光闌的聚光鏡實(shí)現(xiàn)觀測,主要適用于活細(xì)胞或不染色的組織切片觀察,在實(shí)驗(yàn)教學(xué)過程中,除了正確引導(dǎo)醫(yī)學(xué)研究生遵守相差觀察的基本操作方法,同時更為重要的是引導(dǎo)他們對使用相差觀察的標(biāo)本認(rèn)識和掌握。對他們來說,在日后的科學(xué)研究中,為常用的是培養(yǎng)細(xì)胞的顯微觀察。首先,對于細(xì)胞器材的選擇,一般建議使用玻璃材質(zhì)和塑料材質(zhì)的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)板和培養(yǎng)瓶。它們多為無色透明,可直接在倒置顯微鏡上進(jìn)行觀察,不用倒掉細(xì)胞液和經(jīng)過其他處理。其次,在進(jìn)行顯微觀察中,不要隨意打開器材的蓋子,以免污染細(xì)胞后,對于操作人員來說,需佩戴手套、口罩和白大衣,不僅可以保護(hù)自身健康而且可以防止細(xì)胞污染。
3.觀察的正確使用。倒置顯微鏡的功能之三是觀察,其基本原理是利用激發(fā)光激發(fā)樣本產(chǎn)生,從而實(shí)現(xiàn)樣本的形狀與定位觀察,主要適用于標(biāo)記樣本的觀察。觀察是倒置顯微鏡的重要功能,其配件昂貴且使用特殊。要想醫(yī)學(xué)研究生正確地掌握觀察的操作使用規(guī)范,教師除了教會他們掌握基本的操作方法,同時更為重要的是教會他們掌握它的特殊性。首先,在標(biāo)本制作中,載玻片和蓋玻片應(yīng)表面光潔且厚度適宜(載玻片在0.8mm~1.2mm之間,蓋玻片在0.17mm左右);標(biāo)本應(yīng)厚度適宜,同時避免細(xì)胞重疊或雜質(zhì)掩蓋;封裱劑應(yīng)使用甘油和碳酸鹽緩沖液(0.5mol/LPH9.0~9.5)的等量混合液。其次,在觀察前,應(yīng)關(guān)閉房間內(nèi)的電燈和倒置顯微鏡的白光,確保處于暗室環(huán)境。后,在觀察中,應(yīng)嚴(yán)格控制觀察時間,一般以1~2小時/次為宜,否則會出現(xiàn)衰減和消失的現(xiàn)象;調(diào)整光源時應(yīng)佩戴防護(hù)眼鏡,避免紫外線對眼鏡的傷害。
4.圖像拍攝的正確使用。在科學(xué)研究中,不僅要求倒置顯微鏡可以實(shí)現(xiàn)多種觀察,而且要求倒置顯微鏡可以實(shí)現(xiàn)圖像拍攝。倒置顯微鏡系統(tǒng)通過光電轉(zhuǎn)換將光學(xué)顯微鏡與計算機(jī)結(jié)合在一起,不僅可以在目鏡上進(jìn)行顯微觀察,而且可以在計算機(jī)上進(jìn)行實(shí)時動態(tài)圖像的觀察、編輯和保存。
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