精品视频在线观看专区,饥渴老熟妇乱子伦视频,五月天综合婷婷综合社,国产精品美女久久久久久小说

移動端

您所在的位置：食品機械設(shè)備網(wǎng)>技術(shù)首頁>分析方法

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您？ 在線咨詢

禽白血病J亞型（ALV-J）ELISA試劑盒使用說明書

來源：北京伯樂生命科學(xué)發(fā)展有限公司上海辦事處 （上海天崛電子科技有限公司）   2011年02月14日 08:54   980
禽白血病J亞型（ALV-J）ELISA試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用      目的：本試劑盒用于測定禽血清，血漿及相關(guān)液體樣本中白血病J亞型 （ALV-J）的含量。
實驗原理：
 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中禽白血病J亞型 （ALV-J）水平。用純化的禽白血病J亞型 （ALV-J）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白血病J亞型 （ALV-J），再與HRP標記的羊抗人抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白血病J亞型 （ALV-J）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中禽血病J亞型 （ALV-J）含量。
 
試劑盒組成：

試劑盒組成
48孔配置
96孔配置
保存
說明書
1份
1份
 
封板膜
2片（48）
2片（96）
 
密封袋
1個
1個
 
酶標包被板
1×48
1×96
2-8℃保存
標準品：135pg/mL
0.5ml×1瓶
0.5ml×1瓶
2-8℃保存
標準品稀釋液
1.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
2-8℃保存
酶標試劑
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
樣品稀釋液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
顯色劑A液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
顯色劑B液
3 ml×1瓶
6 ml×1瓶
2-8℃保存
終止液
3ml×1瓶
6ml×1瓶
2-8℃保存
濃縮洗滌液
（20ml×20倍）×1瓶
（20ml×30倍）×1瓶
2-8℃保存

 
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1.         標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為90 pg/mL，60pg/mL ，30 pg/mL，15 pg/mL，7.5pg/mL）。
2.         加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.         配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.         加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.         溫育：操作同3。
8.         洗滌：操作同5。
9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.     測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
計算：
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，   
在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD     
值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋      
倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標      
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值      
代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋      
倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。            
試劑盒性能：
1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。
2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于9%和11%
 
檢測范圍：                                             
3pg/mL -100pg/mL                                       
                           
保存條件及有效期：
1.試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
版權(quán)與免責(zé)聲明： 凡本網(wǎng)注明“來源：食品機械設(shè)備網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-食品機械設(shè)備網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：食品機械設(shè)備網(wǎng)m.hg0881.cn”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。

本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其它來源（非食品機械設(shè)備網(wǎng)m.hg0881.cn）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點或和對其真實性負責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負版權(quán)等法律責(zé)任。

浙公網(wǎng)安備 33010602000101號