引言
水是生命之源,是人類(lèi)以及一切生物賴(lài)以生存的必不可少的重要物質(zhì)?！渡铒嬘盟l(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》(GB 5749)是我國(guó)開(kāi)展飲用水水質(zhì)監(jiān)督管理的重要依據(jù)。2023年4月1日起，《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》(GB 5749-2022)[1]正式實(shí)施，對(duì)提升我國(guó)飲用水水質(zhì)、保障飲用水水質(zhì)安全發(fā)揮了重要作用。與原有《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》(GB 5749-2006)相比，新標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容更具有科學(xué)性、實(shí)用性，更契合新形勢(shì)下飲用水衛(wèi)生安全的要求。與該標(biāo)準(zhǔn)配套的GB/T 5750-2023《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法》[2](104項(xiàng)指標(biāo))也已于2023年3月17日頒布，10月1日正式實(shí)施。GB/T 5750-2023標(biāo)準(zhǔn)歷時(shí)5年，經(jīng)過(guò)了3輪意見(jiàn)征求，有超過(guò)500名行業(yè)專(zhuān)家參與GB/T 5750修訂工作。本次修訂主要大幅增加了高通量的分析方法；大幅擴(kuò)展了質(zhì)譜技術(shù)的應(yīng)用范疇；重點(diǎn)加強(qiáng)了自動(dòng)化程度高的檢測(cè)方法；進(jìn)一步強(qiáng)化了以人為本的制標(biāo)理念；充分體現(xiàn)了方法標(biāo)準(zhǔn)的配套性和前瞻性。
其中GB/T 5750.9-2023《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 第9部分：農(nóng)藥指標(biāo)》部分，增加了包括氯硝柳胺在內(nèi)9種農(nóng)藥的檢驗(yàn)方法。氯硝柳胺是WHO唯一保留推薦使用的殺螺藥，它具有殺螺效率高、持效長(zhǎng)等優(yōu)勢(shì)，在控制血吸蟲(chóng)病中起到了重要的作用。隨著氯硝柳胺在我國(guó)持續(xù)、大范圍、大劑量使用，引發(fā)附近水域的水生動(dòng)物急性死亡事情有所增多。氯硝柳胺對(duì)于非目標(biāo)生物的毒性，越來(lái)越引起人們的關(guān)注。因水中氯硝柳胺的含量較低，GB/T 5750.9-2023采用萃取-反萃取分光光度法或液液萃取高效液相色譜法，2種方法均采用傳統(tǒng)的樣品前處理過(guò)程，需要消耗大量水樣及有機(jī)溶劑，操作復(fù)雜，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且方法容易受到污染，也增加了操作人員暴露在有機(jī)試劑中的幾率，不利于身體健康。在線固相萃取(On-line SPE)結(jié)合HPLC是一種簡(jiǎn)單、快速、精確的樣品在線前處理與檢測(cè)方法。使用Vanquish Online 2D-LC色譜系統(tǒng)，可以實(shí)現(xiàn)樣品自動(dòng)化在線富集，濃縮以及基質(zhì)去除等。與其他前處理和檢測(cè)方法相比，提高了抗污染能力，分析效率高，操作簡(jiǎn)單，靈敏度高，成本低，滿足實(shí)際分析檢測(cè)的需求。
本方法的原理如圖1，首先通過(guò)自動(dòng)進(jìn)樣器將大體積樣品直接注入到在線固相萃取柱上，利用Vanquish雙三元液相色譜系統(tǒng)(或配備兩套泵)的富集泵按照設(shè)定的富集清洗程序?qū)⑷軇┹斎氲焦滔噍腿≈锨逑吹魳悠分谢|(zhì)干擾，同時(shí)待分析物被富集在固相萃取柱上，待清洗過(guò)程完成后通過(guò)閥切換將在線固相萃取柱切換至分析流路，利用雙梯度液相的分析泵按照設(shè)定的分析色譜條件將待分析物從固相萃取柱上洗脫至分析柱上進(jìn)行檢測(cè)分析。
圖1：On-line SPE原理圖
01
儀器配置：
Vanquish Online 2D-LC色譜系統(tǒng)，包括：
雙三元泵Dual Pump CN
自動(dòng)進(jìn)樣器Split Sampler CT
柱溫箱Column Compartment C(配2位6通閥)
二極管陣列檢測(cè)器Diode Array Detector CG
變色龍色譜管理軟件 Chromeleon CDS 7.2.10
02
色譜條件：
分析柱：Acclaim 120 C18,5μm，4.6*250mm(PN：059149)
富集柱：Acclaim RSLC Polar Advantage II，3μm，3.0*30mm(PN：066276)
流動(dòng)相A：0.1%磷酸水；流動(dòng)相B：甲醇
流速：1mL/min
柱溫：30℃
波長(zhǎng)：330nm
進(jìn)樣體積：1mL
表1 系統(tǒng)梯度條件
03
樣品處理：
取連續(xù)實(shí)際水樣，用0.22μm濾膜過(guò)濾，直接進(jìn)樣。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
圖2：標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜
圖3：標(biāo)準(zhǔn)溶液結(jié)果
GB/T 5750.9-2023標(biāo)準(zhǔn)中采用甲醇和水作為流動(dòng)相，未調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值。氯硝柳胺pKa為7.3，在中性流動(dòng)相中會(huì)同時(shí)存在離子態(tài)和質(zhì)子態(tài)，洗脫得到的峰型較差。因此，本方法采用0.1%磷酸水和甲醇作為流動(dòng)相。標(biāo)準(zhǔn)溶液中氯硝柳胺組分可有效檢出，且峰型對(duì)稱(chēng)，理論塔板數(shù)高。On-line SPE法在富集濃縮的過(guò)程中可去除基質(zhì)干擾，無(wú)其他組分影響氯硝柳胺的檢測(cè)。
圖4 濃度2ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液圖譜
標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定液液萃取高效液相色譜法的最低檢測(cè)質(zhì)量為2ng，因此本方法通過(guò)濃度為2ppb的溶液考察檢測(cè)靈敏度。氯硝柳胺組分可明顯檢出，信噪比S/N=17.5，滿足標(biāo)準(zhǔn)中定量限要求，說(shuō)明Vanquish液相色譜On-line SPE法檢測(cè)氯硝柳胺的靈敏度優(yōu)異。
圖5：線性圖譜
圖6：線性結(jié)果
圖7：重復(fù)性結(jié)果
在濃度范圍2-200ppb內(nèi)考察線性情況，氯硝柳胺組分具有良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2>0.999。標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣6針，重復(fù)性良好，氯硝柳胺保留時(shí)間RSD為0.06%，峰面積RSD為0.43%。
表2 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果
圖8：實(shí)際樣品圖譜
通過(guò)此方法，對(duì)實(shí)驗(yàn)室附近的自來(lái)水、桶裝水等多批次水樣進(jìn)行了檢測(cè)分析，暫無(wú)氯硝柳胺組分檢出。選擇3種濃度水平進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，考察方法的準(zhǔn)確度。加標(biāo)回收率為98.27%~100.26%，說(shuō)明方法準(zhǔn)確度好，滿足檢測(cè)需求。
小結(jié)
1. Vanquish液相色譜On-line SPE法可用于生活飲用水中氯硝柳胺的含量檢測(cè)分析，方法簡(jiǎn)單、峰型好、靈敏度高、線性關(guān)系好、準(zhǔn)確度高。
2. 在線固相萃取法所需水樣少，有機(jī)溶劑用量少，前處理和分析測(cè)試一體化，省時(shí)省力，響應(yīng)了新國(guó)標(biāo)GB/T 5750-2023自動(dòng)化程度高檢測(cè)方法的發(fā)展思路。
賽默飛基于雙三元液相色譜平臺(tái)的On-line SPE法針對(duì)多環(huán)芳烴、苯胺類(lèi)化合物以及微囊藻毒素、甲萘威、呋喃丹等多種農(nóng)殘的檢測(cè)均有詳細(xì)的解決方案，在對(duì)水樣的分析測(cè)試中具有廣闊的應(yīng)用前景。
賽默飛Vanquish系列液相色譜平臺(tái)，具有性能穩(wěn)定、流速精度高、梯度延遲體積靈活調(diào)節(jié)等特點(diǎn)，聯(lián)合智能、可靠的Chromeleon色譜數(shù)據(jù)系統(tǒng)，能夠滿足企業(yè)以及科研機(jī)構(gòu)對(duì)不同品種的質(zhì)量研究和檢測(cè)需求。
參考文獻(xiàn)：
[1] GB 5749-2022，生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) [S].
[2] GB/T 5750-2023，生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法 [S].
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