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霉菌和酵母的測(cè)試片檢測(cè)方法       方法編號(hào)：5031

 1 適用范圍：本品可用于各類食品及飲用水中霉菌和酵母菌的計(jì)數(shù)。

2 方法原理：將霉菌營養(yǎng)培養(yǎng)基、吸水凝膠和酶顯色劑加載在紙片上，通過培養(yǎng)，在酶顯色劑的放大作用下，使霉菌和酵母菌在紙片上顯現(xiàn)出出來，通過計(jì)數(shù)報(bào)告結(jié)果。

3方法特點(diǎn)：與傳統(tǒng)方法相比，省去了配制培養(yǎng)基、消毒和培養(yǎng)器皿的清洗處理等大量輔助性工作，即開即用，操作簡(jiǎn)便。培養(yǎng)時(shí)間由一周縮短為48h～72h。

4 操作方法

4.1樣品處理：無菌稱取樣品25g（或25mL）放入含有225mL無菌生理鹽水的采樣瓶或均質(zhì)杯內(nèi)，經(jīng)充分振搖做成1:10的稀釋液，用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌水的試管內(nèi)，用1mL滅菌吸管反復(fù)吸吹50次做成1:100的稀釋液，以此類推，每個(gè)稀釋度更換一支滅菌吸管。

4.2接種：

4．2．1一般食品選2～3個(gè)稀釋度進(jìn)行檢測(cè)，含菌量少的液體樣品（如食用純水和礦泉水等）可直接用原液檢測(cè)。將檢驗(yàn)紙片水平放臺(tái)面上，揭開上面的透明薄膜，用滅菌吸管吸取樣品原液或稀釋液1mL，均勻加到中央的濾紙片上，然后輕輕將上蓋膜放下，靜置5min，每個(gè)稀釋度接種兩片。

4.2．2用手指先沿方格區(qū)邊緣刮一下，防止水外流，然后再在中間輕輕推刮，使水分在紙片方格區(qū)內(nèi)均勻分布，并將氣泡趕走。

4．3培養(yǎng)：將加了樣的檢驗(yàn)紙片每12片疊放在一起，放入自封袋中，平放在28℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h開始觀察計(jì)數(shù)。

4.4結(jié)果判斷與計(jì)數(shù)：霉菌和酵母菌在紙片上生長后會(huì)顯示藍(lán)色斑點(diǎn)，霉菌菌落顯示的斑點(diǎn)略大或有點(diǎn)擴(kuò)散，酵母菌落則較小而圓滑，許多霉菌在培養(yǎng)后期全呈現(xiàn)其本身*的顏色。選擇菌落數(shù)適中（10～50個(gè)）的紙片進(jìn)行計(jì)數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后即為每克（或毫升）樣品中霉菌和酵母菌的數(shù)目。

5 計(jì)數(shù)原則及報(bào)告方式：

5.1 通常選擇菌落在10～50個(gè)之間的紙片進(jìn)行計(jì)數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。

5.2具體計(jì)數(shù)原則可參照細(xì)菌（菌落）總數(shù)的測(cè)定方法進(jìn)行。

6 附加說明：由于霉菌常以孢子的形式于空氣中到處傳播，而多種樣品是要求霉菌酵母菌不得撿出，因此檢測(cè)霉菌時(shí)需特別小心操作，取樣用品、稀釋用水和吸管吸頭等都需仔細(xì)消毒，接種時(shí)盡量避免空氣流動(dòng)，動(dòng)作要干凈利落，每次用滅菌生理鹽水接一片空白對(duì)照，以免出現(xiàn)假陽性結(jié)果。