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關(guān)注:蛋白質(zhì)的體外表達(dá)與進(jìn)化技
來(lái)源:
2006年10月19日 10:22
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蛋白質(zhì)體外表達(dá)與進(jìn)化技術(shù)包括核糖體展示技術(shù)和mRNA展示技術(shù)。與蛋白質(zhì)體內(nèi)表達(dá)系統(tǒng)相比,體外表達(dá)技術(shù)可產(chǎn)生較大容量的蛋白質(zhì)文庫(kù)(約1012~1013左右),同時(shí)可在回收編碼蛋白質(zhì)的信息時(shí)對(duì)文庫(kù)進(jìn)行了進(jìn)化。
核糖體展示技術(shù)易構(gòu)建大容量的文庫(kù),可減少由于細(xì)胞內(nèi)表達(dá)所產(chǎn)生的差異性,易于產(chǎn)生突變。它可用于表達(dá)和篩選具有特異結(jié)合能力的功能性單鏈抗體。mRNA均和核糖體相連,形成scFv一核糖體一mRNA復(fù)合體,用抗原篩選后得到編碼該抗體的cDNA,以cDNA為模板繼續(xù)進(jìn)行下一輪的表達(dá)和篩選。核糖體展示技術(shù)模擬了體內(nèi)抗體的進(jìn)化過程。zui后得到的篩選產(chǎn)物序列十分相似,均來(lái)源于核糖體展示前的原始序列。mRNA展示通過在體外翻譯一段和嘌呤霉素相連的mRNA來(lái)產(chǎn)生蛋白質(zhì)文庫(kù),翻譯后形成的mRNA一蛋白質(zhì)復(fù)合體用PCR的方法回收編碼新蛋白質(zhì)的序列,可產(chǎn)生大于1O13的多肽或蛋白質(zhì)文庫(kù)。在mRNA展示中產(chǎn)生的抗體片段文庫(kù)與人的天然免疫系統(tǒng)及構(gòu)建的基因工程抗體文庫(kù)相比發(fā)生了顯著的進(jìn)化,親和力得到成熟。
蛋白質(zhì)體外表達(dá)和進(jìn)化技術(shù)的應(yīng)用使構(gòu)建超大容量的文庫(kù)成為常規(guī)方法,文庫(kù)構(gòu)建和mRNA回收時(shí)應(yīng)用PCR技術(shù)可在每一輪表達(dá)篩選后對(duì)文庫(kù)進(jìn)行進(jìn)化,十分有利于抗體的親和成熟。目前,核糖體展示技術(shù)已廣泛應(yīng)用于篩選、進(jìn)化具有較高親和力的scFv。而mRNA展示技術(shù)應(yīng)用較少,因此還需要廣泛的應(yīng)用mRNA展示技術(shù)以評(píng)價(jià)該技術(shù)在蛋白質(zhì)表達(dá)和進(jìn)化領(lǐng)域的意義。
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