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Hoechst 33258染色液(1mg/ml)使用說明書

【產(chǎn)品組成】

【保存條件】

—20℃,避光,12個(gè)月

【產(chǎn)品概述】

  Hoechst 33258 也稱 bisBenzimide H 33258或HOE 33258 ，分子式為C₂₅H₂₄N₆O · 3HCl。Hoechst 33258是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料，對(duì)細(xì)胞的毒性較低，常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。Hoechst 33258也用于普通的細(xì)胞核染色、DNA 染色。Hoechst 33258 染色液是濃縮的儲(chǔ)存液，稀釋后使用，一般推薦工作濃度為 1～5μg/ml，用于固定細(xì)胞或組織的細(xì)胞核染色。

【使用方法】

(一)固定的組織細(xì)胞染色

1、根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體要求，用無菌去離子水稀釋到自己所需濃度，即為Hoechst 33258染色工作液。細(xì)胞核染色時(shí)，一般推薦工作濃度為1～5μg/ml。

2、于細(xì)胞或組織樣品，固定后沖洗去除固定劑。如果需要進(jìn)行免疫熒光染色，則*行免疫熒光染色，染色完畢后再按后續(xù)步驟進(jìn)行Hoechst 33258染色，如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行后續(xù)的Hoechst 33258染色。

2、室溫放置，輕輕吸除Hoechst 33258染色液。

4、用無菌的PBS或生理鹽水清洗2～3次，每次3～5min。

5、直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。

(二)活細(xì)胞染色

1、根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體要求，用無菌去離子水稀釋到自己所需濃度，即為Hoechst33258染色工作液。細(xì)胞核染色時(shí)，一般推薦工作濃度為1～5μg/ml。

2、取96、24、6孔板培養(yǎng)細(xì)胞至合適狀態(tài)，按96孔板加入100μl、24孔板加入500μl、

6孔板加入1ml的比例，加入適當(dāng)?shù)腍oechst 33258染色液，染液必須充分覆蓋細(xì)胞。

3、在適宜于細(xì)胞培養(yǎng)的條件下培養(yǎng)。

4、輕輕吸除Hoechst 33258染色液。

5、用無菌的PBS或生理鹽水清洗2～3次。

6、進(jìn)行熒光檢測(cè)。

【注意事項(xiàng)】

1、Hoechst 33258染色液(1mg/ml)應(yīng)稀釋至合適的濃度后使用。

2、熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡快檢測(cè)?；罴?xì)胞或組織染色后宜立即觀察。

3、為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

4、避免反復(fù)凍融，否則容易失效。

5、Hoechst 33258對(duì)人體有一定刺激性，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。

6、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。