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 1主題內(nèi)容與適用范圍

　　本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用α-*測(cè)定小麥粉破損淀粉值的原理使用的試劑、儀器、分析

　　的步驟以及結(jié)果計(jì)算。

　　本標(biāo)準(zhǔn)適用于小麥粉破損淀粉值的測(cè)定。

　　2方法原理

　　小麥粉中破損淀粉對(duì)α-*的敏感性大大高于未破損淀粉，在常溫下能被α-

　　*降解生成糊精和一定量的還原糖。利用此特性，在規(guī)定的條件下，用α-*

　　降解小麥粉中破損淀粉，再用鐵氰化鉀法測(cè)定其還原糖量，并根據(jù)法蘭德的經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)

　　算小麥粉中的破損淀粉值。

　　3試劑

　　以下試劑未經(jīng)標(biāo)明的均為分析純?cè)噭疄檎麴s水。

　　3.1緩沖溶液

　　溶解4.1g無水乙酸鈉于水中，加入3mL冰乙酸，再用水稀釋至1000mL，pH值應(yīng)

　　為4.7±0.1。

　　3.2提取溶液

　　將20g氯化鈉及0.2g乙酸鈣溶于水中，再稀釋至1000mL。

　　3.3α-*液

　　稱取活性相當(dāng)于15000±1500A的α-*制劑溶于500mL提取液中，再加入

　　500mL緩沖液，α-*活性測(cè)定見附錄A（補(bǔ)充件）a-*活性測(cè)定。此溶液用

　　時(shí)現(xiàn)配。

　　3.410%（V/V）硫酸溶液。

　　3.512%鎢酸鈉溶液。

　　3.60.1M堿性鐵氰化鉀溶液

　　稱取32.9g干燥純凈的鐵氰化鉀與44.0g*溶于1000mL水中，貯于棕色

　　瓶避光保存。

　　3.7乙酸鹽溶液

　　70g氯化鉀和40g硫酸鋅溶于水中，加入200mL冰乙酸，再用水稀釋至1000mL。

　　3.810%*溶液。

　　3.91%淀粉溶液。

　　3.100.1M*溶液

　　稱取24.82g*（含5個(gè)結(jié)晶水）和3.8g四硼酸鈉溶于1000mL水中，貯

　　于棕色瓶避光保存，一星期后按GB5490《糧食、油料和植物油脂檢驗(yàn)一般規(guī)則》附錄

　　B規(guī)定方法標(biāo)定其濃度。

　　3.11酸洗石英砂。

　　4儀器和用具

　　4.1玻璃試管：φ25×220mm。

　　4.2量筒：50mL；25mL。

　　4.3恒溫水?。嚎煽販?0±0.1。

　　4.4秒表。

　　4.5加液器或移液管：2mL；10mL。

　　4.6移液管：5mL。

　　4.7玻璃漏斗及中速濾紙。

　　4.8電爐。

　　4.9錐形瓶：100mL。

　　4.10滴定管：10mL。

　　4.11天平：感量0.01g；0.1mg。

　　4.12pH計(jì)或精密pH試紙：可測(cè)pH4.7±0.1。

　　5分析步驟

　　5.1稱樣量

　　一般小麥粉均假定其水分含量為14.0%，淀粉含量為68%-72%，稱樣量為1.00

　　0.01g。如果淀粉含量過高或過低時(shí)，則稱樣量應(yīng)按式（1）計(jì)算：

　　70

　　稱樣量（g）=-----------

　?。?5-p-M）

　　式中：P——100g試樣中蛋白質(zhì)的克數(shù)（含氮量×5.7）；

　　M——100g試樣中水分的克數(shù)。

　　5.2酶解

　　稱取5.1規(guī)定量的試樣于玻璃試管中，加入1小勺酸洗石英砂，混勻并將試樣搖松

　　傾斜于試管底部，準(zhǔn)確量取46mL已預(yù)熱至30℃的α-*液，先將少許α-*液

　　加入試樣中并盡量搖勻，立即計(jì)時(shí)，再加入其余α-*液，加蓋試管并上下顛倒搖

　　動(dòng)約30次使試樣均勻懸浮。迅速將試管浸入30℃水浴中，然后每隔10min取出試管，

　　上下顛倒搖動(dòng)10次使試樣重新均勻懸浮，恒溫酶解剛好60min時(shí)，取出試管，立即加

　　入2mL10%硫酸溶液，充分混勻后，再加入2mL12%鎢酸鈉溶液，搖勻并放置約2min

　　后，用中速濾紙過濾。充去zui初幾滴，收集濾液于干凈錐形瓶中，此濾液即為試樣測(cè)定

　　液。

　　另取一支試管不加小麥粉試樣，同時(shí)同上操作，所得濾液即為空白對(duì)照液。

　　5.3測(cè)定還原糖

　　準(zhǔn)確吸取5mL試樣液于試管中，再準(zhǔn)確加入10mL0.1M堿性鐵氰化鉀溶液，混合

　　后將試管浸入劇烈沸騰的水中（可將試管置于鐵絲籠架放入鋁鍋煮沸的水中，每次可同

　　時(shí)作多個(gè)樣品的測(cè)定），繼續(xù)加熱待水再沸騰后開始計(jì)時(shí)，準(zhǔn)確反應(yīng)20min后，取出試

　　管立即置流水冷卻。冷卻后將試管中溶液倒入錐形瓶中，并用25mL乙酸鹽溶液分三次

　　洗滌試管一并倒入錐形瓶?jī)?nèi)，再加入10ml10%*溶液。然后用0.1M*

　　溶液滴定至淡黃色，再加入約1mL1%淀粉液，繼續(xù)滴定至溶液藍(lán)色消失（半分鐘內(nèi)溶

　　液不返藍(lán)色），記錄用去*溶液的體積為V1（mL）。

　　吸取空白對(duì)照液5mL代替試樣液，同上操作，記錄用去*溶液的體積為

　　V2（mL）。

　　6結(jié)果計(jì)算

　　6.1氧化5mL樣品液（相當(dāng)于0.1g小麥粉樣品）中還原糖所需0.1M鐵氰化鉀體積V

　　按式（2）計(jì)算；

　　c

　　V=（V2-V1)×---………………………………（2）

　　0.1

　　式中：V——氧化試樣液中還原糖所需的0.1M鐵氰化鉀液的體積，mL；

　　V1——滴定試樣液用去*的體積，mL；

　　V2——滴定空白液用去*的體積，mL；

　　c——*的摩爾濃度，M；

　　0.1——換算成0.1M鐵氰化鉀溶液體積的系數(shù)。

　　6.2小麥粉麥芽糖值的確定

　　根據(jù)式（2）計(jì)算所得V值在表1中用插入法查出相應(yīng)的100g小麥粉中含有麥芽糖

　　的克數(shù)，即為該樣品的麥芽糖值L。

　　6.3小麥粉破損淀粉值（P）按式（3）計(jì)算：

　　P=（5×L-3.5)×6………………………………（3）

　　式中：L——小麥粉麥芽糖值。

　　7結(jié)果允許差

　　兩次測(cè)定結(jié)果之差不得超過平均值的5%，測(cè)定結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后一位。

　　附錄A

　　α-*活性的測(cè)定

　?。ㄑa(bǔ)充件）

　　A1主題內(nèi)容和適用范圍

　　本補(bǔ)充件規(guī)定了用比色法測(cè)定α-*活性的方法。

　　本補(bǔ)充件適用于各種來源的α-*制劑及谷類產(chǎn)品的α-*活性的測(cè)定。

　　A2方法原理

　　α-*能降解--限制糊精，經(jīng)過不同的反應(yīng)時(shí)間后，反應(yīng)混合物與碘的顯色

　　強(qiáng)度隨時(shí)間增加而降低，用測(cè)定這種顯色強(qiáng)度隨時(shí)間降低的速度來反映α-*的活

　　性。

　　A3試劑

　　以下試劑未經(jīng)標(biāo)明的均為分析純，水為蒸餾水。

　　A3.10.2%氯化鈣溶液。

　　A3.2碘貯備液

　　溶解11.0g*于少量水中，加入5.5g結(jié)晶碘，攪拌至碘*溶解，再稀釋至

　　250mL，置棕色瓶中貯于暗處。此液可保存一個(gè)月。

　　A3.3碘稀釋液

　　溶解40.0g*于水中，加入4.0mL碘貯備液，用水稀釋至1000mL，用時(shí)現(xiàn)配。

　　A3.4緩沖溶液

　　溶解164g無水乙酸鈉或272g三水乙酸鈉（CH3COONa·3H2O）于水中，加入120mL

　　冰乙酸，用水稀釋至1000mL。

　　A3.5可溶性淀粉。

　　A3.6β-*液

　　取10g具有酶活性的新鮮黃豆粉（粗細(xì)度為通過15mm孔篩的篩下物）于燒杯中，

　　加入85mL水和15mL0.05M硫酸溶液，充分?jǐn)噭?，靜置15min后，用中速濾紙過濾，該

　　濾液用于制備β--限制糊精。

　　A3.70.05M硫酸溶液。

　　A3.8β--限制糊精

　　稱取5.00g（以干態(tài)計(jì)）可溶性淀粉于小燒杯中，加入約20mL水，攪拌使成懸浮

　　液，然后將懸浮液邊攪拌邊緩慢倒入盛有約100mL沸騰水的高型燒杯中，并用洗瓶將

　　小燒杯中淀粉全部轉(zhuǎn)移至高型燒杯，繼續(xù)攪拌并加熱使緩慢沸騰2min，然后用表面皿

　　蓋上燒杯口，取出用流水冷卻，再加入25mL緩沖溶液及50mLα-*液，在室溫下，

　　放置24h后，加入一匙浮石粉，在10min內(nèi)緩慢加熱至沸，保持沸騰5min后，取出流水

　　冷卻，zui后用水定容至250mL，搖勻、過濾，濾液中加幾滴甲苯，在25℃以下貯存5

　　天，此溶液的pH須在4.7±0.1。

　　A4儀器和用具

　　A4.1玻璃試管。

　　A4.2高型燒杯：250mL。

　　A4.3容量瓶：250mL；100mL。

　　A4.4玻璃漏斗：φ6cm。

　　A4.5表面皿：φ7cm。

　　A4.6移液管：2mL；5mL；15mL。

　　A4.7量筒：25mL；50mL。

　　A4.8加液器或移液管：10mL。

　　A4.9電爐：1000W。

　　A4.10恒溫水?。嚎煽販?0±0.1℃及20±0.5℃。

　　A4.11秒表。

　　A4.12實(shí)驗(yàn)?zāi)シ蹤C(jī)。

　　A4.13篩子：孔徑為1.0mm及0.8mm。

　　A4.14pH計(jì)或精密pH試紙：可測(cè)pH4.7±0.1

　　A4.15分光光度計(jì)。

　　A5分析步驟

　　A5.1α-*溶液的配制

　　A5.1.1酶制劑α-*液的配制

　　稱取α-*制劑48mg，用0.2%氯化鈣溶液溶解并稀釋至100mL。根據(jù)該溶

　　液酶活性的大小再用0.2%氯化鈣稀釋至適合于測(cè)定活性的溶液，稀釋后的溶液應(yīng)使

　　35%-60%的限制糊精在15-40min內(nèi)被降解，即zui后測(cè)得的吸光度值應(yīng)為底物校準(zhǔn)時(shí)

　　吸光度值的40%-65%。

　　A5.1.2麥芽粉及其他產(chǎn)品α-*液的配制

　　測(cè)定麥芽粉可稱樣100g，如測(cè)定其他產(chǎn)品，則根據(jù)酶活性的大小擬定稱樣量，均

　　按下述步驟提取酶液。

　　將預(yù)先在30℃水浴中恒溫10min以上的0.2%氯化鈣溶液100±0.5mL加入試樣中，

　　加塞振搖使充分混合，立即置于30℃水浴中，每隔15min取出試管，上下顛倒混合10

　　次，再浸入水?。ㄕ駬u次數(shù)與程度對(duì)結(jié)果有影響），恒溫提取60min后取出過濾（不要

　　振搖），此濾液即為酶提取液。

　　A5.2底物的校準(zhǔn)

　　A5.2.1混合5mLβ—限制糊精及15mL0.2%氯化鈣溶液于燒杯中。

　　A5.2.2在試管中先加入10mL稀釋碘液，再加入A5.2.1的混合液2mL，然后用適量的

　　水稀釋（一般稀釋水量為20-40mL之間），混合后在20℃下用1cm比色杯在波長(zhǎng)575nm

　　下測(cè)其吸光度。

　　A5.2.3調(diào)整原稀釋水量再按A5.2.2操作，反復(fù)多次直至測(cè)得的吸光度值在0.55-0.6

　　之間，記錄此時(shí)稀釋水量V（mL），即為該底物的校正水量。

　　A5.2.4在另一支已加入10mL稀釋碘液的試管中，加入2mL0.2%氯化鈣液代替混合

　　液，同A5.2.2操作，作為A5.2.2測(cè)定吸光度時(shí)的空白對(duì)照。

　　A5.3α-*活性測(cè)定

　　A5.3.1將待用--限制糊精預(yù)熱至30℃。

　　A5.3.2吸取A51稀釋后的酶液15mL于試管中，置30水浴恒溫5!10min。

　　A5.3.3用速流移液管吸取5mL已預(yù)熱的--限制糊精迅速加入含15mL酶液的試管中，

　　在加入糊精的同時(shí)立即用秒表計(jì)時(shí)，然后分別在30恒溫10min和30min時(shí)吸取此混合

　　液，按下述操作。

　　A5.3.4吸取2mL上述混合液立即加入預(yù)先加入10mL稀釋碘液的試管中，再加入

　　A5.2.3測(cè)得的水的體積V（mL）（即校正水量），混勻后在20下恒溫，并用1cm比色

　　杯在波長(zhǎng)575nm下測(cè)定吸光度（如測(cè)定一系列樣品，可在所有樣品均完成顯色后再一起

　　測(cè)定吸光度，但zui長(zhǎng)間隔時(shí)間不得超過1h）。

　　A5.3.5用2mL0.2%氯化鈣溶液代替混合液，同A5.3.4操作，作為A5.3.4測(cè)定吸光

　　度時(shí)的空白對(duì)照。

　　A5.3.5用2mL0.2%氯化鈣溶液代替混合液，同A5.3.4操作，作為A5.3.4測(cè)定吸光

　　度時(shí)的空白對(duì)照。