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膠原酶

來源:上海力敏實業(yè)有限公司   2012年11月15日 08:22   1805

科技名詞定義

中文名稱:
膠原酶
英文名稱:
collagenase
定義:
編號:EC 3.4.21.49。來自梭菌的酶,切割膠原蛋白中*殘基的氨基端肽鍵。而來自皮蠅(Hypoderma lineatum)幼蟲的酶,切割天然膠原蛋白*殘基的氨基端肽鍵。
應用學科:
生物化學與分子生物學(一級學科);酶(二級學科)
以上內(nèi)容由全國科學技術名詞審定委員會審定公布

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膠原酶的化學名為膠原蛋白水解酶(Collagenase),它能在生理PH和溫度條件下特異性地水解天然膠原蛋白的三維螺旋結(jié)構(gòu),而不損傷其它蛋白質(zhì)和組織。膠原酶的化學本質(zhì)是一種蛋白質(zhì),因此,這對溫度、PH和導致蛋白質(zhì)變性的各種因素均非常敏感,極易受到外界條件的影響而改變其本身的構(gòu)象和性質(zhì)。

 

目錄

簡介
的配置
的使用
 
 

編輯本段簡介

  按其存在的方式不同可分為人體內(nèi)源性和藥用兩種。人體內(nèi)源性是指人體內(nèi)部本身所具有的,如牙齦、觸膜等上皮組織和關節(jié)滑膜、椎間盤內(nèi)都不同程度的存在著這種,它在體內(nèi)膠原蛋白的分解過程中發(fā)揮著*的作用。藥用是指利用生物制藥的高科技手段從溶組織梭狀芽孢桿菌的發(fā)酵液中提取、純化并精制而得的白色或類白色無菌凍干粉針生物制劑。
 
  (collagenase)是從溶組織梭狀細胞芽孢桿菌提取制備的,主要水解結(jié)締組織中膠原蛋白成分。當擬消化的組織較硬,內(nèi)含較多結(jié)締組織或膠原成分時,用*解離細胞的效果較差,這時可采用解離細胞法。 僅對細胞間質(zhì)有消化作用而對上皮細胞影響不大。因此適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織,可使上皮細胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為zui終濃度200U/ml(約為1mg/mL)或0.03%~0.3%。分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細胞,要根據(jù)所要分離消化的組織類型選擇類型。
 
  1、Ⅰ用于上皮、肺,脂肪和腎上腺組織細胞的分離。用于消化組織中連接部分使其成為單個細 胞,用于哺乳動細胞的分離。
 
  2、Ⅳ包含至少7種蛋白酶成分,分子量從68-130KD不等。它能消化多種組織。
 
  3、Ⅴ包含至少7種蛋白酶成分,分子量從68-130KD不等。它可用于胰腺小島組織的分離,將結(jié)締組織分離成單個細胞。
 
  4、Ⅱ適用于肝臟,骨,甲狀腺,心臟和唾液腺組織。
 

編輯本段的配置

  溶液同*一樣配制、消毒滅菌和儲藏。
 
  注意:
 
  因為Ⅰ型分子顆粒比*大,不容易過濾,因此可以用蔡式濾器過濾除菌。
 
  鈣、鎂離子和血清成分不會影響的消化作用,因而可用BSS(如D-hanks或者PBS)或含血清的培養(yǎng)液配制。
 

編輯本段的使用

  1.將漂洗、修剪干凈的組織剪成1~2mm3左右小塊
 
  2.將組織塊放入離心管(三角燒瓶)中加入30~50倍體積的溶液,旋緊蓋子(密封燒瓶)。
 
  3.將燒瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱內(nèi),每隔3min振搖一次,如能放在37℃的恒溫震蕩水浴箱中則更好。
 
  消化時間與組織的類別很有關系,對于某些腫瘤組織或其他較致密結(jié)締組織,消化時間4~48h,對于容易消化的組織可以采用37℃震蕩消化15~45min,也可以根據(jù)具體情況而定。如組織塊已分散而失去塊的形狀,一經(jīng)搖動即成細胞團或單個細胞,可以認為已消化充分。上皮組織經(jīng)消化后,由于上皮細胞對此酶有耐受性,可能仍有一些細胞團未*分散,但成團的上皮細胞比分散的單個上皮細胞更易生長,因此,如無特殊需要可以不必再進一步處理。
 
  4.收集消化液(有時含個別組織塊及沒有充分消化的組織碎屑則需用100目不銹鋼網(wǎng)過濾),離心1000r/min,5min,去除上清,用Hanks液或者無血清培養(yǎng)液離心漂洗1~2次,去除上清,加培養(yǎng)液制成細胞懸液,接種培養(yǎng)瓶。

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