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免疫熒光染色(間接法)

來(lái)源:北京伯樂生命科學(xué)發(fā)展有限公司上海辦事處 (上海天崛電子科技有限公司)   2009年02月09日 08:49   1908

1、切片固定后用毛細(xì)滴管吸取經(jīng)適當(dāng)稀釋的免疫血清滴加在其上,置于染色盒中保持一定的濕度,37℃作用30min。然后用0.01mol/l pH7.2PBS洗兩次,10min,用吸水吸去或吹干余留的液體。

2、再滴加間接熒光抗體(如兔抗人 -球蛋白熒光抗體等),同上步驟,染色30min,37℃,緩沖鹽水洗兩次10min,攪拌,緩沖甘油封固,鏡檢。

對(duì)照染色:①抗體對(duì)照:用正常兔血清或人血清代替免疫血清,再用上法進(jìn)行染色,結(jié)果應(yīng)為陰性。②抗原對(duì)照:即類屬抗原染色,亦應(yīng)為陰性。③陽(yáng)性對(duì)照。

間接法中上述方法稱雙層法(Double Layer Method)。另一種稱夾心法,即用未標(biāo)記的特異性抗原加在切片上先與組織中之相應(yīng)抗體結(jié)合,再用該抗原之熒光抗體重疊結(jié)合其上,而間接地顯示出組織和細(xì)胞中抗體的存在,方法步驟如下:

①切片或涂片固定后,置于染色濕盒內(nèi)。

②滴加未標(biāo)記的特異性抗原作用切片于37℃,30min。

③緩沖鹽水洗2次,每次5min,吹干。

④滴加特異性熒光抗體再用切片于37℃,30min。

⑤如③水洗。

⑥緩沖甘油封固,鏡檢。

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